1.機(jī)械因素:
振動與撞擊:色譜柱受到機(jī)械振動或撞擊可能產(chǎn)生空隙,導(dǎo)致柱效降低。因此,在使用過程中應(yīng)避免色譜柱的掉落或柱壓的急劇變化,同時在輸液時不要打開排液閥。
壓力波動:液相色譜儀色譜柱使用過程中的驟然壓力波動也會對色譜柱床層產(chǎn)生影響,導(dǎo)致峰形變差和柱效降低。
2.樣品與流動相污染:
雜質(zhì)吸附:樣品或流動相中的雜質(zhì)可能吸附在色譜柱上,導(dǎo)致柱效下降。這些雜質(zhì)會產(chǎn)生拖尾峰,影響色譜圖的清晰度和準(zhǔn)確性。為避免這種情況,可以使用高溶解性溶劑清洗色譜柱,或取出污染填料并裝填新的填料。
篩板堵塞:液相色譜柱入口篩板堵塞會導(dǎo)致柱壓升高、色譜峰拖尾等問題。這通常是由分析樣品中的微粒雜質(zhì)造成的。因此,在分析前應(yīng)對樣品進(jìn)行過濾或離心處理,以減少雜質(zhì)對色譜柱的污染。
3.填料與濾片問題:
填料堵塞:長時間使用后,高效液相色譜柱內(nèi)的填料可能因雜質(zhì)積累而堵塞,影響柱效。此時可以嘗試反向連接色譜柱,使用清洗溶劑以小流量送液進(jìn)行清洗,或打開柱頭清洗或更換濾片。
填料變性:長時間暴露在不適宜的環(huán)境中或受到某些化學(xué)物質(zhì)的侵蝕,可能導(dǎo)致色譜柱填料變性,從而降低柱效。此時需要更換新的色譜柱。
4.溶劑選擇不當(dāng):
如果選擇的樣品溶劑與色譜柱固定相之間的相互作用過強(qiáng),可能導(dǎo)致樣品與溶劑之間難以分離,從而影響柱效。因此,在選擇樣品溶劑時應(yīng)盡量避免使用高溶解性的試劑。
5.熱、氧與化學(xué)損壞:
熱損壞:超出色譜柱的溫度上限會導(dǎo)致固定相和管表面的加速損壞,從而降低柱效。
氧損壞:在高溫下,氧會對色譜柱造成嚴(yán)重的損壞。
化學(xué)損壞:長時間暴露在化學(xué)試劑中,特別是流動相中的某些化學(xué)物質(zhì)可能對柱填料產(chǎn)生損傷,導(dǎo)致柱效下降。
高效液相色譜柱柱效下降的原因多種多樣,需要在使用過程中注意避免機(jī)械振動、撞擊和壓力波動等問題;嚴(yán)格控制樣品和流動相的質(zhì)量;定期清洗和更換濾片;合理選擇樣品溶劑;以及注意色譜柱的使用溫度和化學(xué)環(huán)境等。這些措施有助于延長色譜柱的使用壽命并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。
